XVI век.

1500 г. Осада Берестейского замка 15-тысячным войском крымского хана Менгли Гирея, которое сожгло предместья и отступило только после получения откупа.

Начало XVI в. В городе насчитывается 833 домовладельца, из которых 87 - евреи.

С 1504 г. В документах упоминается местная мера длины - аршин берестейский, что свидетельствует об известности города как торгового центра.

1511 г. Получение права на ежегодное проведение 3-х двухнедельных ярмарок международного значения, что указывает на важную роль Берестья в международной торговле и на его большой экономический потенциал.

1514 г. Брестскому раввину Михаилу Юзефовичу присвоено звание главного раввина ВКЛ, через несколько лет он получил шляхетство.

1515 г. На Сейме в Берестье утверждается военный статут ВКЛ, определяющий повинности городов по несению военной службы. В случае войны Берестье должно было поставить армии ВКЛ 150 конных всадников и обеспечить денежный сбор 50 коп литовских грошей.

1525 г. Большой пожар, в котором сгорели замок и административный центр города. Потерпевшие от пожара мещане освобождены от налогов. Вынесен запрет на строительство деревянных домов высотой более 2-х этажей.

1539 - 1550 гг. Раввином в Бресте служит Иехиль Лурия (1510 - 1573) - один из самых известных и авторитетных до настоящего времени толкователей Талмуда, чей опыт духовного познания священных еврейских текстов сохраняет несомненную ценность и в современной иудаистике.

1550 - 1570 гг. Действует открытая Николаем Радзивиллом Черным первая на территории Беларуси типография, в которой работали книгоиздатели Бернард Воевудка (1553 - 1554 гг.), Станислав Мурмелиус (1558 - 1560 гг.), композитор-поэт Цыприян Базылик (1560 - 1570 гг.). Изданы десятки различных наименований книг (история, юриспруденция, сатира и др.) на высоком художественном уровне с использованием ренессансной графики, наборных орнаментов, шрифтов, заставок, концовок, фигурной ксилографии и пр. В 1563 г. в типографии издается Брестская (Радзивилловская) Библия на средства Николая Радзивилла Черного в переводе на польский язык с еврейского, греческого и латинского языков. Известны имена некоторых переводчиков, это - Г. Оршака, П. Статорис, Я. Тенавдас, Е. Шоман, Я. Любельчик.

1554 г. По привилею короля Сигизмунда II Августа город получает право иметь гербовую печать с изображением четырехугольной вежи на красном поле в слиянии двух рек.

1558 г. В городской типографии Ян Заремба издает первый у восточных славян нотный сборник - канционал "Песни хвал Боских", в котором среди прочих произведений были песни Ц. Базылика.

1563 г. В Бресте издана Брестская, или Радзивилловская, Библия на средства берестейского старосты Николая Радзивилла Черного. Издание было великолепно иллюстрировано и являлось одним из лучших в Великом княжестве Литовском и в Польше.

1564 г. Князь Николай Радзивилл Черный на правом берегу р. Мухавец основал 2 лютеранские сельскохозяйственные колонии для "вольных голендов" (голландцев-протестантов). Поселения имели названия Нейдорф и Нейбров и располагались в нескольких километрах от г. п. Домачево, в них жило 273 голландца. Колонии просуществовали до Великой Отечественной войны, когда их жители были вывезены в Германию.

1566 г. Берестье становится центром Берестейского воеводства. Новое воеводство получило герб Погоню с изображением голубого всадника на красном поле. Первым воеводой был Юрий Тышкевич. Первый каштелян - Ян Хайка. Упоминается 56 ремесленных специальностей. Ремесленники составляют около 25% населения. В городе 26 улиц (Бискупская, Ветряная, Виленская, Жидовская, Кустинская, Краковская, Ковальская, Кобринская, Гнилая, Войтовская, Перевозная, Луцкая, Приорская, Михалкова, Свиная, Угринка, Русская, Немецкая, Налозки и др.), 1091 домовладелец и 1166 заселенных усадеб. Каждый горожанин имеет сенокосы, выгоны, огороды, поля и сады в предместьях. В городе есть православные монастыри Симеоновский и Рождественский, православные церкви Троицкая и Микулинская.

1566 г. Упоминание о первых городских актерах - ими были скоморохи Тит, Герасим, Герман.

1-го июля 1569 г. В городе Люблине польская Корона и Великое княжество Литовское объединились в единое государство - Речь Посполитую. Договор получил название Люблинской унии, которой предусматривалось единовластие избираемого двумя сторонами короля, создание общих сейма, сената и денежных единиц. Объединенные государства обязывались проводить единую иностранную и военную политику. При этом сохраняли собственную административную власть, казну, армию и судопроизводство, а также в связи с этим собственные законы и язык. В результате унии у Варшавы появилась возможность играть роль столицы всей Речи Посполитой. Брест получает новые возможности для расширения культурных и экономических контактов с Западной Европой.

1569 г. Основана аптека - одна из первых в Беларуси. Упоминается аптекарь из Бреста Станислав, получивший разрешение устроить в местном замке склад аптекарских вещей. Известно также, что владельцем аптеки в Бресте был Сымон Душинский (1577 г.). Еще одна аптека была основана в 1583 г. До 1639 г. аптекой в Бресте владел Станислав Бобровский. Она выходила дверью на рынок, имела 3 шкафа, 2 ларя, столик с выдвижным ящиком для кассы, на окнах - железные решетки, рядом каменный погреб. В описаниях аптеки упоминаются 2 травника и 2 антидотария (сборники о противоядиях).

1567 г. Шведские войска захватили, разграбили и сожгли город.

1588 г. В г. Бресте сооружены первые мостовые.

1589 г. Образована Брестская экономия.

28 января 1591 г. Издание королевской грамоты, разрешившей берестейским православным мещанам иметь братства и школы при них. Создание православного братства и школы при церкви святого Николая. Позднее возникает Колядное братство. В братских школах преподают учителя (дыдаскалы) 7 свободных наук - Тривиум (грамматика, риторика, диалектика) и Квадриум (арифметика, геометрия, астрономия, музыка), практикуется хоровое пение по 5-линейной нотной системе.

1592 - 1595 гг. В одной из братских школ г. Бреста преподает белорусский педагог-гуманист, церковный деятель, языковед, переводчик Лаврентий Зизаний (Тустановский). Будучи в Бресте, подготовил учебники "Азбука с Лексисом" и "Грамматика словенска совершенного искусства осми части и слова...". "Азбука" делится на три раздела - материал для обучения письму и чтению, вспомогательный лексический материал, церковные полемические тексты и молитвы. "Лексис" - первый белорусский толковый словарь, содержащий статьи о 1061 слове, представляет собой значительное культурно-просветительное явление в истории Беларуси.

1593 г. Епископ Берестейский и Владимирский Ипатий Потей дает грамоту и фундуш на основание при церкви святого Николая братства, где определен порядок богослужения "перед большим алтарем". По дошедшим до нас сведениям в церкви имелся алтарь "в античном стиле" с позолотой и серебром, деревянными скульптурами святых, значительным количеством икон на полотне и дереве.

6 - 10 октября 1596 г. Заключение Брестской церковной унии в церкви святого Николая, в соответствии с которой под патронатом римского папы Климентия XVIII объединялись католическая и православная церкви. Результатом этого слияния стало образование униатской (греко-католической) церкви.

15 декабря 1596 г. Утверждение акта Брестской церковной унии универсалом короля Сигизмунда III Вазы с призывом признания униатских епископов.

Около 1597 г. В Бресте в семье ремесленника родился белорусский общественный и религиозный деятель писатель-полемист Афанасий Филиппович. С 1620г. он был учителем Яна Лубы, которого правительство Речи Посполитой готовило на русский престол как мнимого сына русского царя Лжедмитрия и Марины Мнишек. В 1644 г. А. Филиппович арестован как государственный преступник за разглашение государственной тайны в отношении Яна Лубы, объявлен заложником за Я. Лубу и посажен в Варшавскую тюрьму, затем сослан в Киево-Печёрскую Лавру. Вышел на свободу в 1647 году. В 1648 году за помощь казацким отрядам Б. Хмельницкого и распространение агитационных антиправительственных материалов расстрелян в лесу у д. Гершоны под Брестом. Впоследствии на этом месте были обретены его нетленные мощи, на месте гибели основан мужской монастырь. Мощи брестского святого в настоящее время находятся во Франции, небольшая их часть - в Свято-Симеоновском соборе.